关于无血清细胞冻存液的操作规范

  无血清细胞冻存液的操作规范：

  1、培养细胞至对数生长晚期，显微镜观察其外观、形态、有无污染等。选择状态良好的细胞进行冻存操作(注：贴壁生长细胞，用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化，进行细胞计数;悬浮生长细胞，进行细胞计数)。

  2、500～1000g离心5min，弃上清。

  3、 加入适量的细胞冻存液，重悬细胞，使细胞浓度达到1～10×106/ml，置于冻存管中密闭。

  4、采取逐级降温保存：4℃放置20min，-20℃放置30min，-70℃ 过夜，最后置于液氮罐中长期存储。

  注意：

  务必超净工作台内无菌操作，避免污染。

  杂交瘤细胞冻存时应定期复苏，以检查细胞的活性和分泌抗体的稳定性。