上篇我们了解了细胞培养无菌操作的注意点,那么,接下来就让BWIN必赢为您介绍一下培养基的注意点吧~
1、培养基的选择依细胞种类而定。如果是从别的实验室借来的细胞,初阶段一定要保持细胞原有的培养条件;特殊种类的细胞,比如内皮细胞,可以借鉴网上培养成功的条件,添加一些特定成分。
2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。
3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺,用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。但是谷氨酰胺在溶液中不稳定,保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。所以尽量不要大批量购买培养,也不要一次配太多的培养基。
4、细胞适合的培养基PH值是7.2-7.4,偏高或偏低都不好,但相对于碱性条件而言,细胞更耐酸。原代细胞对PH值的变化很敏感,而永生性细胞相对来说忍受力更强一些。
5、造成皿或瓶内培养基PH值变化的原因有很多:细胞增殖速度的快慢、孵箱内二氧化碳的浓度不准确、培养瓶的盖子拧紧或者发生了污染。如果发现细胞生长过慢,刨除细胞本身状态的原因,可以在培养液中添加丙同酸钠(丙同酸钠是糖酵解的中间产物,为细胞生长提供ATP,提供合成大代谢所需要的碳源,使用浓度通常是0.1mM)。
6、细胞发生污染,培养基的PH值也会发生变化。
7、孵箱内湿度对维持培养基的渗透压也有很重要的作用。大部分细胞适应的渗透压在260-320mOsm/kg。湿度不够时,培养基蒸发,液体的渗透压就会升高。
8、培养基在使用前需提前从冰箱拿出,使其恢复至室温或者37度水浴。
9、操作过程中,如果抢头中已经有培养基或其他液体成分,不要再经过酒精灯被高温加热。高温不仅会使有效成分失效,更有可能产生有毒物质。
10、我们购买的培养基瓶上都会标注避光保存,这是因为培养基中的某些成分遇光会产生过氧化氢,具有细胞毒性。
以上就是BWIN必赢为您分享的一些关于细胞培养的小知识,如您想了解更多,欢迎咨询!