R1000 RNA Transfection Reagent

R1000 RNA Transfection Reagent

产品简介：

R1000 RNA Transfection Reagent是一种独有的RNAi特异性阳离子脂质体转染试剂，本品推荐用于将siRNA、microRNA(miRNA)、mimic、inhibitor 等小片断RNA 转染入动物细胞（包括各种细胞系、原代细胞、悬浮细胞、昆虫细胞等）。本产品可以常温运输，在多种细胞系的验证中均表现了很好的RNA 转染效率，并有很低的细胞毒性。

产品特点：

1.超高的转染效率，且所需RNAi 浓度低，基因抑制效果更好，非特异性效应极少

2.针对miRNA 拮抗剂和模拟物具有出色的转染效率

3.细胞毒性低、易于优化

4.可用于多种细胞类型

5.简单、高通量的即用型转染

使用方法：

(不同的细胞已及转不同面积的孔板操作起来略有不同，以24 孔板siRNA 转染为例)。

1.提前一天细胞种植

贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24 孔板中，以转染时细胞汇合度在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。

悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3 进行转染实验。

2.转染过程

⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μl。

注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM 或1640。

⑵取1ul 的R100，然后加入24ul 无血清稀释液体，充分混匀，制成R100 稀释液，终体积为25μl。室温静置5 分钟。

⑶将R100 稀释液和RNA 稀释液充分混合（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10 次以上）混合，室温静置15 分钟。转染复合物制备完成。

⑷将50μl 转染复合物滴加到有0.45ml 全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，混合均匀。

⑸转染后6 小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96小时得到结果。

注意：

1.siRNA 转染后，继续培养24-72 小时在mRNA 水平得到结果，继续培养24-96 小时在蛋白水平得到结果。mRNA 转染后，根据需要在24 小时后得到结果。

2.由于血清和培养条件等差异，转染后镜下培养基中可能出现少量黑点状沉淀，为转染试剂和血清中蛋白结合产物，不影响转染结果和细胞状态，可通过换液除去。

不同细胞培养容器转染推荐用量

3.优化

由于RNA 序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA 和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。

RNA 浓度和转染试剂量的优化(24well)

                    此方案仅供参考

根据优化实验结果，固定RNA(μg):转染试剂量(μl)的比值，按培养器皿表面积比例应用到其他培养容器。

包装规格：

保存温度:

冰袋或者湿冰运输，短时间内可室温运输，但需避免光源热源，长时间储存于4℃，切勿冻存。